島津二維液相色譜新應用|流動相含離子對試劑的化藥雜質質譜鑒定方法

離子對試劑：極性藥物分析繞不開的話題

液相色譜是藥物雜質含量測定和有關物質分離分析常用的技術手段。對一個陌生的化合物，ODS反相色譜柱通常方法開發條件會選擇酸性pH流動相。然而，總有些化合物，它們或含氨基、或含羧基、磺酸基團、磷酸基團，極性較強在反相色譜柱上沒有保留。打開2020版《中國藥典》第二部，不難發現這些品種，名稱中常含有“馬拉酸”、“鹽酸”、“堿”、“酸”等關鍵詞。對于這類強極性化合物的分析，藥典給出的答案是：流動相中添加離子對試劑。例如丁溴東莨菪堿、貝敏偽麻的有關物質流動相條件中含有十二烷基硫酸鈉；馬來酸曲美布汀的流動相含有戊烷磺酸鈉；鹽酸頭孢吡肟的流動相含有辛烷磺酸鈉；葉酸、頭孢美唑和對氨基水楊酸鈉的流動相含有四丁基氫氧化銨。離子對試劑的添加，增強了極性化合物的保留，改善了藥物與雜質的分離，是極性藥物分析的殺手锏。

離子對試劑：“質譜不能承受之重”

辛烷磺酸鈉和四丁基硫酸氫銨等常用離子對試劑，屬于不揮發鹽類，質譜響應強且信號經久不衰，持續抑制目標化合物的電離。一旦誤操作進入質譜端，需要清洗整個離子通路才能恢復質譜的正常狀態。常規二維液相在線除鹽系統僅能去除無機鹽，無法去除離子對試劑。這是因為無機鹽（如磷酸鹽）在二維反相色譜柱上無保留，在死時間將其切至廢液從而實現在線除鹽。然而離子對試劑具有較強的疏水性，在常規ODS色譜柱上強烈吸附顯著拖尾，因此不能被常規二維液相系統去除。

ReDual：一款可以同時分離無機、有機、陰、陽離子的“神柱”

ReDual系列色譜柱，是離子交換反相混合鍵合相色譜柱，共分為三款：

下圖是采用ReDual AX-C18 (4.6 mm I. D. × 150 mm L., 5 μm)分析磷酸二氫鈉、四丁基硫酸氫銨和卡絡磺鈉混合樣品的色譜圖。該款色譜柱表面鍵合叔胺基團，在pH 2-7范圍內色譜柱表面帶陽離子。除疏水作用外，其對陰離子具有離子交換作用，對陽離子具有離子排斥作用。為分離極性類似的陽離子和陰離子型化合物提供了條件。下圖中四丁基氨根離子峰型對稱，不拖尾無殘留，可以通過閥切換導入廢液實現在線去除。

應用案例：卡絡磺鈉參比制劑中雜質結構鑒定

本應用采用常規中心切割二維液相系統，無需改造儀器；餾分轉移過程配有紫外檢測器監控，不存在檢測盲區；離子對試劑的去除未使用強酸或強堿性試劑；方法耐用性好。一維使用C18反相色譜柱，流動相添加磷酸二氫鈉（含四丁基硫酸氫銨，pH 3.0）；二維使用ReDual AX-C18色譜柱，在線去除四丁基硫酸氫銨和磷酸二氫鈉，實現目標化合物的質譜鑒定。

總結

島津特色中心切割二維色譜雜質鑒定系統，二維使用ReDual? AX-C18強陰離子交換反相混合鍵合相色譜柱，成功實現一維流動相中離子對試劑和無機鹽的在線去除，并對卡絡磺鈉參比制劑中未知雜質進行了質譜鑒定。